根据过柱后的结果确定下一个使用的缓冲液 pH
案列介绍
Unique Autopure蛋白纯化系统 凝胶过滤色谱分离蛋白质
材料
色谱介质:Sephacryl S-200,蛋白质分离范围(5~250)×103
色谱柱:XK16/60预装柱
色谱设备:Unique Autopure25
混合样品:含单克隆抗体,分子量180000;牛血清白蛋白(68000),溶菌酶(14000)
NaOH 0.5 mol/L
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NaCl 200 mmol/L
PB 20 mmol/L
PH7.0 缓冲液
方法
1. 凝胶除菌处理:超纯水冲洗柱子后,用0.5mol/L NaOH 正向冲洗柱,流速 3mL/min,冲洗3 柱体积
2. 平衡: NaOH 处理完毕后,知名核酸分离纯化柱厂家,知名生产商,用超纯水冲洗 2 柱体积,接着用含 200mmol/LNaCl 和20mmol/L PB 的 7.0PH缓冲液冲洗 5~10倍柱体积
3. 上样:平衡完毕后,上海宸乔生物科技有限公司,上海宸乔生物科技,选择样品泵进行上样,知名核酸分离纯化柱厂家,正规生产商,上样流速3mL/min,上样体积为 1mL
4. 洗脱:上样结束后,用平衡缓冲液进行洗脱
5. 清洗与保存
纯化结束后,用 0.5mol/L NaOH 反向冲洗 2 柱体积,冲洗时间 30~60min,知名核酸分离纯化柱厂家,提供代理,冲洗结束后,用超纯水正向冲洗 5
柱体积,再用 20%乙醇冲洗 3柱体积,然后拆下柱子,两端封死,低温保存
2、溶液交换不彻底
严格控制上样体积,上样体积不超过柱体积30%
案例介绍
离子交换是蛋白纯化中的重要手段,即可以用于捕获阶段,也可以用于精纯阶段
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